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| ［摘要］目的 探讨用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中持续稳定高表达的可行性，为深入研究Gnaq在脑衰老及相关疾病中的作用及分子机制奠定基础．方法 通过NCBI网站查询Gnaq的编码序列并设计相应的克隆引物，以高表达Gnaq的HepG2细胞的cDNA为模板，PCR扩增得到带适宜酶切位点的目的基因，将目的基因连接入慢病毒载体PLIG，转染感受态细胞，筛选阳性克隆，测序鉴定后包装慢病毒，转染SH-SY5Y细胞；于转染后24 h、第5代时检测GFP荧光表达率；检测第3代、第5代PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq的转录水平．结果 荧光检测显示SH-SY5Y细胞的转染效率接近100%，此表达效率可持续至转染后第5代；RT-PCR检测显示转染后第3代、第5代的PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq呈明显的高转录水平，未明显受冻存的影响．结论 利用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞内长期稳定高表达具有可行性，可用PLIG-Gnaq-SH-SY5Y作为模型细胞深入研究Gnaq基因在神经细胞中扮演的角色及相关机制． |
| 关键词: ［关键词］慢病毒载体 Gnaq基因 SH-SY5Y细胞 过表达 |
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