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| ［摘要］目的 构建pSIREN-HIF-1α/shRNA重组质粒并测序鉴定，为下一步探索鼻咽癌基因治疗的RNA干扰（RNA interference，RNAi）途径奠定基础．方法 根据基因库HIF-1αcDNA序列（NM_001530/ NM_181054）以及Reynolds设计原则，设计并合成两端有酶切位点的60个碱基的寡核苷酸链，退火成互补双链后将退火产物与RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体链接后，热转化至大肠杆菌JM109菌株中，提取质粒进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，测序分析．结果 PCR扩增片段出现约470 bp大小的目的基因条带，与预期结果相符；凝胶电泳证实重组载体构建成功，插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致．结论 成功构建重组质粒pSIREN-HIF-1α/shRNA，为下一步用脂质体包装并转染鼻咽癌细胞的研究奠定基础． |
| 关键词: ［关键词］RNA干扰 鼻咽癌 质粒 HIF-1α 短发卡RNA |
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