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| ［摘要］目的 构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1（TNIP1）真核表达载体（pEGFP-N3-TNIP1），观察了解外源TNIP1蛋白的细胞内定位及其在HeLa细胞中的表达．方法 应用RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增TNIP1基因的开放阅读框（ORF），将目的片段亚克隆入pEGFP-N3中，筛选阳性克隆，提取质粒测序进行鉴定．将表达质粒转染HeLa细胞，荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹分别从mRNA水平和蛋白水平来检测TNIP1在HeLa细胞中的表达情况．MTT实验检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期．结果 重组质粒双酶切鉴定，在1.9 kb左右有明显的条带，DNA测序结果证实重组质粒pEGFP-N3-TNIP1中含有的目的基因片段与GenBank 上登录号为BC014008.1的TNIP1基因序列完全一致；荧光倒置显微镜观察重组质粒转染HeLa细胞后有绿色荧光蛋白的表达，转染48 h后通过qRT-PCR和Western blot分别检测到TNIP1mRNA和蛋白质的表达，均较对照明显升高，外源性的TNIP1蛋白主要定位于细胞质中．结论 成功构建了pEGFP-N3-TNIP1真核表达载体，外源表达的TNIP1蛋白主要分布于HeLa细胞的细胞质部分，过表达TNIP1蛋白不影响HeLa细胞的细胞周期及细胞生长存活. |
| 关键词: ［关键词］TNIP1蛋白 HeLa细胞 基因克隆 表达 |
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